أجسام مضادة أحادية النسيلة من الأرنب ضد الهيستون أحادي الميثيل H3-K9 | Q16695 / P68431 – جسم مضاد محدد للميثيل للاستخدام في WB، ChIP، ELISA، والمزيد

المواصفات والمعلمات الأساسية للمنتج

الخلفية البيولوجية: وظيفة الهيستون H3 وتوطينه

الهيستون H3 هو مكون أساسي للنواة، الوحدة المتكررة الأساسية للكروماتين. يلعب دورًا مركزيًا في تكثيف الحمض النووي وتنظيم إمكانية وصول آليات النسخ والاستنساخ والإصلاح إليه.

من السمات الرئيسية لبيولوجيا الهيستون H3 فرضية "شفرة الهيستون" – حيث تحدد التركيبات المحددة للتعديلات ما بعد الترجمة (PTMs) على ذيله الطرفي N المرن حالات كروماتين متميزة وعمليات نووية لاحقة. ومن بين هذه التعديلات، يعد ميثلة اللايسين في الموضع 9 (H3K9me) أحد أكثر العلامات التي تمت دراستها بشكل مكثف، وغالبًا ما يرتبط بكبت النسخ، وتشكيل الهيتروكروماتين، واستقرار الجينوم.

مراجع ذات صلة: PMID:11242053 PMID:16267050 PMID:17194708

يمكن العثور على اللايسين في الموضع 9 من بروتين H3 الناضج (المقابل للموضع 10 في UniProt) في حالات ميثلة مختلفة – أحادية أو ثنائية أو ثلاثية الميثيل – لكل منها نتائج بيولوجية متميزة. يتركز الهيستون H3 أحادي الميثيل في K9 (H3K9me1) بشكل أساسي في المحفزات والمعززات للجينات النشطة في مناطق اليوكروماتين، حيث يقوم بضبط نشاط النسخ بدقة، على الرغم من اكتشافه أيضًا في الهيتروكروماتين المحيط بالسنترومير في سياقات خلوية محددة.

مراجع ذات صلة: PMID:16185088 PMID:16457588

يوجد الهيستون H3 كمتغيرات متعددة مشفرة بواسطة جينات مختلفة. يتم التعبير عن الهيستون H3.1 الأساسي (SWISS P68431) بطريقة تعتمد على الاستنساخ ويتم دمجه في الكروماتين أثناء الطور S، بينما يتم التعبير عن المتغير الخاص بالخصية H3.1t/H3‑4 (Q16695) حصريًا في الخلايا الخصوية وقد يساهم في ديناميكيات الكروماتين الخاصة بتكوين الحيوانات المنوية. يمتد حاتمة هذا الجسم المضاد إلى منطقة محفوظة بشدة عبر متغيرات H3، مما يتيح الكشف على نطاق واسع.

مراجع ذات صلة: لا يوجد (خصوصية النسيج بناءً على سجلات التسلسل)

على المستوى تحت الخلوي، يتوضع الهيستون H3 في النواة ويرتبط ارتباطًا وثيقًا بالحمض النووي الصبغي.

يتعرف هذا الجسم المضاد بشكل محدد على الشكل أحادي الميثيل لـ H3K9. ونظرًا للطبيعة المحفوظة لموقع التعديل، من المتوقع أن يتفاعل مع أنواع ومتغيرات H3 متعددة.

إرشادات ونصائح تقنية للتجارب

• تحضير العينة لـ WB: فكر في استخدام الهيستونات المستخلصة بالحمض أو المستخلصات المخصبة بالنواة لتحسين نسبة الإشارة إلى الضوضاء. بالنسبة للمستخلصات الخلوية الكلية، قم بتضمين كوكتيلات مثبطات البروتياز المناسبة وتجنب ظروف إزالة الطبيعة التي قد تزيل تعديلات الهيستون.
• التحقق من النوعية: في أي فحص، قم بتأكيد نوعية الجسم المضاد باستخدام ببتيدات K9 أحادية الميثيل مقابل غير الميثيلية الاصطناعية في تجربة منافسة الببتيد (نقطة لطخة أو ELISA). يمكن أن يعمل أيضًا مصفوفة بروتين هيستون H3 المؤتلف مع حالات ميثلة محددة كعنصر تحكم دقيق.
• تحسين ChIP: بالنسبة لترسيب الكروماتين المناعي، يجب تحديد وقت الربط المتقاطع، وكمية الجسم المضاد، وظروف التجانس بالموجات فوق الصوتية تجريبيًا. قد تتطلب الألفة العالية للجسم المضاد للعلامة أحادية الميثيل كمية أقل من الجسم المضاد لكل تفاعل مقارنة بأجسام H3 المضادة العامة. قم دائمًا بتضمين عنصر تحكم للحجب باستخدام ببتيد محدد لأحادي الميثيل.
• اعتبارات IHC و IF: يمكن أن يؤثر التثبيت واسترجاع المستضد على إمكانية الوصول للحاتمة. بالنسبة لـ IHC-P، غالبًا ما تعمل بروتوكولات عينات الفورمالين الثابتة والمضمنة بالبارافين (FFPE) القياسية مع خطوة استرجاع مستضد بوساطة الحرارة (عازل سترات، درجة حموضة 6.0) بشكل جيد؛ ومع ذلك، يوصى بإجراء اختبار أولي. في التألق المناعي، قد يعزز النفاذية القصيرة بالميثانول التلوين النووي.
• تطبيقات ELISA/نقطة لطخة: قم بتغليف الألواح بببتيد H3(1‑21) أحادي الميثيل أو بروتين H3K9me1 مؤتلف كامل الطول لتقييم تقارب الارتباط والخطية. استخدم الببتيد المقرون بـ BSA كبديل.
• التفاعل المتقاطع بين الأنواع: على الرغم من توقع تفاعل واسع النطاق، نوصي بالتحقق من صحة الجسم المضاد في نظام العينة المحدد لديك (مثل الفأر، الجرذ، أو أنواع أخرى ذات صلة) قبل التجارب واسعة النطاق.

CamelBio: جسر التوريد الشامل الخاص بك

تخدم CamelBio كشريك شامل للمواد الخام للتشخيص المخبري (IVD)، حيث تربط بين مصنعي التشخيص، والمختبرات البحثية، والمعاهد من الفكرة إلى العيادة. سواء كنت تقوم بتطوير فحوصات جينية فوقية تعتمد على تعديلات الهيستون أو بناء فحوصات مناعية محددة للميثيل، يمكن لـ CamelBio تزويدك بأزواج الأجسام المضادة المفحوصة، والأجسام المضادة أحادية/متعددة النسيلة المحسنة، والكواشف المساعدة السائبة، وحتى المساعدة في توريد المواد الخام ذات الأهداف النادرة. تشمل مجموعة منتجاتنا هذا الجسم المضاد أحادي النسيلة من الأرنب عالي الألفة ضد الهيستون أحادي الميثيل H3‑K9، المصمم لدعم أبحاثك الجينية فوقية واحتياجاتك التشخيصية بموثوقية واتساق من دفعة إلى أخرى.