جسم مضاد أرنب متعدد النسيلة لثنائي ميثيل هستون H3-K4 (Q16695/P68431) لـ WB، وChIP، وChIP-seq، وIHC-P

المواصفات والمعايير الأساسية للمنتج

الخلفية البيولوجية: وظيفة وتوطين هستون H3.1t/هستون H3.1

الهستون H3 هو مكون أساسي للنواة، وهي الوحدة المتكررة الأساسية للكروماتين. يشكل مع الهستونات H2A وH2B وH4 ثمانيًا يلتف حوله 147 زوجًا قاعديًا من الحمض النووي، مما يضغط الجينوم وينظم إمكانية الوصول إلى الحمض النووي. هذا الهيكل ضروري للعمليات القائمة على قالب الحمض النووي بما في ذلك النسخ والتكرار والإصلاح واستقرار الكروموسومات.

يتم ترميز متغير الهستون H3.1 الأساسي بواسطة جينات متعددة (مثل HIST1H3A حتى HIST1H3J) ويتم ترسيبه على الحمض النووي المنسوخ حديثًا أثناء الطور S. على النقيض من ذلك، فإن النظير H3.1t (الجين H3-4 / HIST3H3) هو متغير خاص بالخصية، يُعبر عنه بشكل رئيسي في الخلايا الخصوية وربما يشارك في إعادة تشكيل الكروماتين أثناء تكوين الحيوانات المنوية.

يتعرض الهستون H3 لتعديلات ما بعد الترجمة (PTMs) واسعة النطاق على ذيله الطرفي N المرن، مشكلاً "شفرة هستونية" تنظيمية معقدة. تشمل تعديلات ما بعد الترجمة المعروفة الميثلة، والأسيتلة، والفوسفرة، وADP-ribosylation، واليوبيكويتنة، وغيرها. تعد ميثلة اللايسين 4 (H3K4) علامة رئيسية: ترتبط ثنائية الميثيل (H3K4me2) بعناصر تنظيم الجينات النشطة والمستعدة مثل المحفزات والمعززات.

تم إنتاج هذا الجسم المضاد ضد ببتيد اصطناعي يتوافق مع الذيل الطرفي N (الأحماض الأمينية 1-100) من الهستون H3 البشري، وهي منطقة تشمل بقية K4 وهي محفوظة بشدة عبر الأنواع. يتعرف الجسم المضاد بشكل محدد على الشكل ثنائي الميثيل لـ K4.

يتوطن الهستون H3 في النواة وهو مكون هيكلي للكروموسومات.

مراجع ذات صلة: PMID:16267050, PMID:17194708, PMID:24681537

إرشادات ونصائح تقنية للتجارب

• يغطي المستضد المناعي الذيل الطرفي N للهستون H3، مما يضمن التعرف على المنطقة التي تحتوي على بقية K4. للكشف الخاص بالميثلة، تحقق من الصحة باستخدام مقايسات منع الببتيد المناسبة أو ضوابط الهستون الطافر.
• لـ Western blotting (WB)، يمكن استخدام مستخلصات غنية بالهستون أو مستخلصات الخلية الكلية. النطاق المتوقع هو حوالي 15 كيلو دالتون. ضع في اعتبارك استخدام غشاء نقل عالي الجودة وحجب ممتد لتقليل الخلفية.
• في ترسيب المناعة للكروماتين (ChIP) وChIP-seq، قد يكون هذا الجسم المضاد مناسبًا لرسم توزيع H3K4me2. قم بتضمين مواقع ضابطة إيجابية (مثل المحفزات النشطة) ومواقع ضابطة سلبية (مثل المناطق بين الجينات) لتقييم النوعية. عند إجراء ChIP-seq، يجب تحضير المكتبة وعمق التسلسل وفقًا للتصميم التجريبي المحدد.
• لـ immunohistochemistry (IHC-P) وimmunofluorescence (IF/ICC)، قد يحسن استرجاع المستضد (على سبيل المثال، عازلة سترات بوساطة الحرارة درجة حموضة 6.0) والنفاذية من الكشف. اختبر طرق تثبيت مختلفة (مثل الفورمالين مقابل الميثانول) حيث يمكن أن تؤثر على توافر الحاتمة.
• يظهر الجسم المضاد تفاعلًا متقاطعًا متوقعًا مع الإنسان والفأر والجرذ وأنواع أخرى بسبب الحفظ العالي للتسلسل للطرف N لـ H3. إذا كنت تستخدم نوعًا جديدًا، ففكر في محاذاة التسلسل لتأكيد حفظ الحاتمة وأجرِ تجربة ضابطة إيجابية.
• يمكن أن تظهر الأجسام المضادة الخاصة بالميثلة تفاعلًا متقاطعًا مع علامات ميثيل-لايسين أخرى. لتأكيد النوعية، قم بتضمين تجارب منع الببتيد التنافسية باستخدام ثنائي ميثيل-K4 وببتيدات معدلة أخرى.
• يجب تحديد التخفيفات المثلى تجريبيًا لكل فحص.

CamelBio: جسر التوريد الشامل الخاص بك

CamelBio هو شريكك الشامل لمواد التشخيص الأولية، حيث يوفر وصولاً موثوقًا إلى هذا الجسم المضاد لثنائي ميثيل هستون H3-K4 ومجموعة واسعة من الأجسام المضادة لأبحاث التخلق المتعاقب وتطوير التشخيص. من أزواج الأجسام المضادة المفحوصة والأجسام المضادة متعددة النسيلة/وحيدة النسيلة المحسنة إلى الكواشف المساعدة السائبة وتوريد المواد الأولية للأهداف النادرة، يدعم CamelBio عملية التطوير بأكملها – من المفهوم إلى العيادة. تواصل مع فريقنا لاستكشاف حلول توريد مخصصة لمشروعك القادم.