مضاد فوسفو-NF-kB p65/RelA-S536 بوليكلونال أرنب للتفلتر الغربي (WB)، والمناعة الخلوية (IF/ICC)، واختبار الإمصاص المرتبط بالإنزيم (ELISA) - Q04206

المواصفات والمعلمات الأساسية للمنتج

الخلفية البيولوجية: وظيفة وتوطين عامل النسخ p65

• الوحدة الفرعية p65 لعامل NF-kappa-B (RELA) هي عامل نسخ مركزي لعائلة NF-kappa-B، وتشفر بروتيناً يزن 60 كيلو دالتون (يعرف أيضاً بـ p65 و NFKB3 و CMCU و AIF3BL3) وله أدوار حاسمة في الاستجابات المناعية والضغطية. إدخال UniProt: Q04206.
• يوجد معقد NF-kappa-B كثنائيات متجانسة أو غير متجانسة؛ يعد الثنائي غير المتجانس RELA-NFKB1 (p50) الأكثر وفرة ويعمل كمنشط نسخي عن طريق الارتباط بمواقع محددة لـ DNA κB في مروجات الجينات.
• يتضمن تنشيط NF-kappa-B الفسفرة المستحثة بالمحفز وتحلل مثبطات IκB، مما يحرر معقد RELA للانتقال من السيتوبلازم إلى النواة. تزيد فسفرة RELA في الموقع Ser536، الواقع في مجال التنشيط النسخي، من نشاطه النسخي وتعتبر علامة مميزة لتنشيط NF-κB القياسي.
• يخضع التوطين داخل الخلوي لـ RELA لرقابة صارمة: في الخلايا الساكنة يوجد في الغالب في السيتوبلازم مرتبطاً بـ IκB؛ وعند التحفيض يتراكم في النواة لضبط تعبير الجينات المستهدفة. يمكن للمناعة الخلوية كشف الانتقال النووي كمؤشر لتنشيط المسار.
• يتعدل RELA بشكل كبير بالفسفرة، والأسيتلة، والميثلة، والنتروسيلة بالكبريت، واليبيكويتين، مما يقوم بضبط مخرجاته النسخية بدقة. إنه ضروري لتعبير السيتوكينات في خلايا T (PubMed:15790681) واستجابة الإنترفيرون من النوع الأول أثناء عدوى SARS-CoV-2 (PubMed:33440148). مراجع ذات صلة: PMID:15790681 PMID:33440148
• يشفر جين RELA أشكالاً متعددة من النسخ المتغير (isoforms)، ويتم ضبط نشاطه من خلال التفاعلات مع العوامل المساعدة ومجددي الكروماتين، مما يبرز طبقات تنظيمية معقدة تتجاوز الدخول النووي البسيط.

إرشادات تجريبية ونصائح تقنية

• قم بإعداد مستخلصات الخلايا أو الأنسجة باستخدام كوكتيلات مثبطات البروتياز والفوسفاتاز للحفاظ على الفسفرة في الموقع Ser536. للتفلتر الغربي، قم بفصل البروتينات بواسطة SDS-PAGE واكشف باستخدام هذا الجسم المضاد بتخفيف ابتدائي يتحقق منه المستخدم النهائي؛ من المتوقع ظهور نطاق قوي بالقرب من 60 كيلو دالتون.
• للمناعة الخلوية أو المناعة الخلوية للأنسجة (IF/ICC)، ثبت الخلايا باستخدام بارافورمالدهيد بنسبة 4% وجعلها منفذة بشكل كافٍ؛ استخدم محلول حظر مناسب لتقليل الارتباط غير النوعي. تحقق من الانتقال النووي لـ NF-kB p65 تحت محفزات التهابية (مثل العلاج بـ TNF-α) للتحقق من الإشارة الخاصة بالفوسفرة.
• في تطبيقات ELISA، فكر في استخدام سيطرة حجب بالببتيد الفوسفوري لتأكيد الكشف الخاص بالفسفرة. قم بترسيب الجسم المضاد لتحديد التراكيز المثالية في سياق الاختبار الخاص بك.
• يمكن أن تختلف ديناميكيات الفسفرة عبر أنواع الخلايا المختلفة؛ قم دائماً بتضمين ضوابط موجبة وسالبة (مثلاً خلايا محفزة مقابل غير محفزة) لتفسير النتائج بدقة.

CamelBio: جسر التوريد الشامل الخاص بك

يقدم CamelBio حلولاً شاملة للتوريد لمصنعي التشخيص، والمختبرات، ومعاهد الأبحاث للمواد الخام عالية الجودة لتشخيص المختبر (IVD)، والخدمات التقنية، والاستشارات—تغطي كل مرحلة من المفهوم إلى العيادة. يمثل هذا الجسم المضاد المضاد لـ Phospho-NF-kB p65/RelA-S536 البوليكلونال من الأرنب التزامنا بتوريد كواشف المناعة الممتازة لمسار إشارات NF-kB، ذات الصلة بأبحاث الالتهاب، والأورام، وعلم المناعة. إلى جانب الأجسام المضادة الفردية، نحن نقدم أزواجاً من الأجسام المضادة تم التحقق منها، وبروتينات مؤتلفة محسنة، ومواد خام حرجة مساعدة—كلها مصممة لتبسيط تطوير الاختبارات لديك.