جسم مضاد بولي كلونال أرنب ضد فوسفو-NF-kB p65/RelA-S311 للتحليل بالنشاف الغربي وELISA - Q04206

المواصفات والمعاملات الأساسية للمنتج

الخلفية البيولوجية: وظيفة عامل النسخ p65 وتوطينه الخلوي

• NF-kappa-B هو عامل نسخ متعدد التأثيرات موجود في جميع أنواع الخلايا تقريبًا، ويعمل كنقطة نهاية لسلاسل نقل الإشارات المختلفة. يشكل ثنائير متماثلة أو غير متماثلة؛ ويعتبر المركب غير المتماثل RELA-NFKB1 الأكثر وفرة ويعمل كمنشط للنسخ الجيني.
• يرتبط RELA (p65) بمواقع kappa-B في محفزات الجينات المستهدفة بألفة ونوعية مميزة خاصة بالثنائير، وينشط النسخ مباشرة كما يعدل إمكانية وصول العوامل الأخرى إلى الكروماتين بشكل غير مباشر.
• في الخلايا غير المنشطة، تظل معقدات NF-kappa-B غير نشطة في السيتوبلازم بفعل مثبطات I-kappa-B. عند التنشيط، تفسفر I-kappa-B بواسطة إنزيمات IKK وتتحلل، مما يحرر RELA لينتقل إلى النواة ويبدأ التعبير الجيني.
• يخضع RELA لتعديلات كثيرة ما بعد الترجمة—تشمل الفوسفلة في مواقع متعددة (مثل S311)، والأسيتلة، والميثيلة، واليوبيكويتنة—التي تنظم نشاطه وثباته وتفاعلاته البروتينية.
• ضروري لتعبير جينات السيتوكين في الخلايا التائية، مما يبرز دوره الحاسم في الاستجابات المناعية التكيفية.
  المراجع ذات الصلة: PMID:15790681
• تم تحديده كعامل نسخ رئيسي يحكم استجابة الإنترفيرون أثناء الإصابة بفيروس SARS-CoV-2. المراجع ذات الصلة: PMID:33440148
• يتركز توطينه داخل الخلية بشكل أساسي في السيتوبلازم في ظروف الراحة بسبب إخفاء إشارة التوطين النووي بواسطة I-kappa-B؛ ويحدث التراكم في النواة بسرعة بعد التنشيط.
• تم توصيفه بكلمات مفتاحية تشمل البروتين الفوسفوري، والأسيتلة، والميثيلة، والاقتران بواسطة Ubl، والرابطة الأيزوببتيدية، والنيتروزلة S-Nitrosylation، مما يعكس الشبكة التنظيمية المعقدة التي تتحكم في هذا العامل الرئيسي للنسخ.

إرشادات تجريبية ونصائح تقنية

• تم تصميم المنشط المناعي، وهو ببتيد فوسفوري اصطناعي يغطي الموقع S311، لإنتاج أجسام مضادة خاصة بالشكل المفسفر. تحقق من النوعية الخاصة بالفوسفلة عن طريق معالجة المحاليل الخلوية بفوسفاتاز لامبدا قبل إجراء التحليل بالنشاف الغربي.
• التطبيقات المناسبة حسب المورد: النشاف الغربي (WB) و ELISA. للنشاف الغربي، استخدم 20-30 ميكروغرام من المستخلص الخلوي الكامل ومحلول حظر قياسي؛ تحقق من حجم النطاق حوالي 60 كيلو دالتون باستخدام ضوابط إيجابية مناسبة (مثل خلايا هيلا المنشطة بـ TNF-α).
• بالنسبة لـ ELISA، فكر في الطلاء بالببتيد الفوسفوري واستخدام نظيره غير الفوسفوري كضابط سلبي لتأكيد الارتباط الخاص بالموقع.
• يتفاعل بشكل متبادل مع البشر والفئران؛ قم بالتحقق الأولي في الخطوط الخلوية أو الأنسجة ذات الصلة من هذه الأنواع. يوصى بتنشيط مسار إشارات NF-kB باستخدام منبهات مثل TNF-α أو PMA/يونوميسين لتعزيز إشارات الفوسفلة.
• تجنب نزع الروابط القاسي عن الغشاء الذي قد يغير حالة الفوسفلة؛ بدلاً من ذلك، استخدم محاليل منخفضة الأس الهيدروجيني أو محاليل منظفة خفيفة إذا لزم الأمر إعادة الفحص.

CamelBio: جسرك الشامل للمصادر

تدعم CamelBio مصنعي التشخيص وفرق البحث بمصادر متكاملة للمواد الخام لكل مرحلة من مراحل التطوير، من مفهوم الفحص إلى التطبيق السريري. هذا الجسم المضاد لـ phospho-NF-kB p65 يناسب خطوط عمل الالتهاب وعلم المناعة والواسمات الحيوية للسرطان، ويمكننا أن نكمله بالبروتينات المؤتلفة المُحققة، وأزواج الأجسام المضادة المتطابقة، وكواشف الكشف المساعدة. تشمل محفظتنا الكميات الكبيرة من الأجسام المضادة الأحادية والبولي كلونية، وكواشف الأهداف النادرة، وإنتاج أجسام مضادة مخصصة خاصة بالفوسفلة لتبسيط تجميع أجهزة التشخيص في المختبر (IVD).