مضاد فوسفوريلي EGFR (T669) متعدد النسيلة للـ WB, IP, ELISA - P00533

المواصفات والمعايير الأساسية للمنتج

الخلفية البيولوجية: وظيفة EGFR وتوطينه

• EGFR هو مستقبل كيناز التيروزين يرتبط برابطات عائلة EGF (EGF, TGFA, AREG، إلخ)، مما يؤدي إلى تفعيل ثنائيات المستقبل المتجانسة أو غير المتجانسة والفوسفوريل الذاتي على بقايا السيتوبلازم الرئيسية، وبالتالي بدء تسلسلات إشارات متعددة. المراجع ذات الصلة: PMID:10805725, PMID:27153536, PMID:2790960, PMID:12297049, PMID:15611079, PMID:17909029
• يقوم EGFR الفوسفوريل ذاتياً بتجنيد بروتينات المحول مثل GRB2، مما ينشط على الأقل أربعة مسارات رئيسية downstream: RAS-RAF-MEK-ERK، و PI3K-AKT، و PLCgamma-PKC، ووحدات STAT، والتي تنظم تكاثر الخلايا، وبقائها، وهجرتها. المراجع ذات الصلة: PMID:27153536
• يقوم EGFR بفوسفرة بروتينات إشارات أخرى بشكل مباشر، مثل RGS16 (تنشيط نشاط GTPase الخاص به) و MUC1 (زيادة تفاعله مع SRC وبيتا-كاتينين)، وبالتالي الربط بين إشارات مستقبلات البروتين المقترن بـ G وعمليات التصاق الخلايا. المراجع ذات الصلة: PMID:11602604, PMID:11483589
• الفوسفرة في الثريونين 669 (T669) هي حدث تنظيمي حاسم يعدل نشاط كيناز EGFR والإشارات اللاحقة، وغالباً ما يرتبط بتنشيط المستقبل ونقل الإشارة.
• قد يعمل الشكل المتباين 2 من EGFR كمضاد طبيعي لعمل EGF، مما يوفر طبقة إضافية من تنظيم الإشارة.
• يتم استغلال EGFR أيضاً كمستقبل لخلية المضيف لدخول فيروس التهاب الكبد C، مما يسهل تكوين مجمعات مستقبلات CD81-CLDN1.
• على المستوى تحت الخلوي، يتوطن EGFR في غشاء الخلية، والشبكة الإندوبلازمية، وجهاز جولجي، والنواة، والجسيمات الداخلية، حيث يؤثر النقل بين المقصورات على مخرجات الإشارة.

التوجيه التجريبي ونصائح تقنية

• المستضد هو ببتيد فوسفوري اصطناعي حول T669؛ لتأكيد خصوصية الفوسفرة، عالج العينات بفوسفاتاز لامدا (lambda phosphatase) ولاحظ فقدان الإشارة في الترحيل الغربي (Western blot).
• بالنسبة لـ WB، فكر في استخدام سلم بروتيني عالي الجودة في نطاق 130-140 kDa وقم بتضمين ضوابط تحميل مناسبة. تحقق من صحة الجسم المضاد في خط الخلايا المستهدف لديك مع التعبير المعروف لـ EGFR.
• في تجارب IP، قم بتحسين نسبة الجسم المضاد إلى المستخلص (lysate) وأكد الترحيل المناعي الناجح من خلال الترحيل المناعي المشترك (co-immunoprecipitation) للتفاعلات المعروفة لـ EGFR أو عن طريق الترحيل باستخدام جسم مضاد شامل لـ EGFR (pan-EGFR antibody).
• قد تتطلب بروتوكولات ELISA طلاءً بالببتيد الفوسفوري أو البروتين بطول كامل؛ قم بإجراء ترسيبات رقعة الشطرنج (checkerboard titrations) لتحديد تركيزات الجسم المضاد والمستضد المثلى.
• يقتصر التفاعل المتقاطع على EGFR البشري؛ إذا كنت تعمل مع عينات من الفئران أو الجرذان، تحقق من التفاعل المتقاطع تجريبياً أو فكر في الكواشف الخاصة بالأنواع.
• بصفته جسماً مضاداً متعدد النسيلة من الأرنب، استخدم جسماً مضاداً ثانوياً مضاداً للأرنب مناسباً للكشف؛ لاحظ أن دفعات الأجسام المتعددة النسيلة قد تختلف، لذا قم بترسيب كل دفعة جديدة.

CamelBio: جسر التوريد الشامل الخاص بك

CamelBio هي شريك توريد موثوق به وشامل للمواد الخام لتشخيص المختبر (IVD)، حيث تقدم أجساماً مضادة ومستضدات ومواد مساعدة تم التحقق منها لدعم أبحاث علم الأورام ونقل الإشارة. هذا الجسم المضاد المتعدد النسيلة ضد فوسفوريلي EGFR-T669 يجسد التزامنا بتقديم أدوات متخصصة للفوسفور عالية الجودة لدراسة مسارات إشارات EGFR. من الأجسام المضادة المخصصة بالجملة إلى توريد الأهداف النادرة، يسرع CamelBio من تطويرك التشخيصي من المفهوم إلى العيادة.