الأجسام المضادة الأرنبية متعددة النسيلة المضادة للفوسفو- AKT1 (Ser473) للاستخدام في لطخة ويسترن، مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم - P31749

المواصفات والمعايير الأساسية للمنتج

الخلفية البيولوجية: وظيفة وتوطين AKT1

• AKT1 (كيناز البروتين سيرين/ثريونين RAC-alpha، المعروف أيضًا باسم PKBα) هو كيناز بروتين سيرين/ثريونين ينتمي إلى عائلة AKT، والتي تضم في البشر ثلاثة أشكال متقاربة (AKT1، AKT2، AKT3) تتحكم في التمثيل الغذائي والتكاثر والبقاء والنمو وتكوين الأوعية الدموية. مراجع ذات صلة: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136

• يعمل AKT1 في اتجاه مجرى PI3K وينقل الإشارات من الأنسولين وعامل النمو المشابه للأنسولين 1 وعامل نمو البشرة وعامل نمو الصفائح الدموية؛ وهو يفسفر أكثر من 100 هدف في اتجاه المجرى، بما في ذلك GSK3 وTSC2 وعوامل نسخ FOXO ومكونات مسار mTORC1، وبالتالي ينسق استقلاب الجلوكوز وتخليق البروتين والتعبير الجيني. مراجع ذات صلة: PMID:12176338, PMID:12964941, PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:21432781

• فسفرة TSC2 عند Ser939 وThr1462 بواسطة AKT1 تخفف من تثبيط mTORC1، مما يحفز نمو الخلية وتخليق البروتين؛ وعلى العكس من ذلك، يفسفر AKT1 ويثبط GSK3α/β لتعزيز تخليق الجليكوجين وتقدم دورة الخلية. مراجع ذات صلة: PMID:12150915, PMID:12172553

• يعزز AKT1 بقاء الخلية عن طريق فسفرة وتعطيل البروتينات المؤيدة لموت الخلايا المبرمج مثل BAD (Ser136) وMAP3K5/ASK1 (Ser83)، وعن طريق تنشيط CREB1 لزيادة التعبير عن البروتينات المضادة لموت الخلايا المبرمج BCL2 وMCL1. مراجع ذات صلة: PMID:10926925, PMID:11154276, PMID:9829964

• ينظم AKT1 ديناميكيات الهيكل الخلوي وهجرة الخلية عن طريق فسفرة ركائز مثل بالادين (PALLD) وSPATA13، مما يؤثر على دوران الالتصاق والحركة. مراجع ذات صلة: PMID:20471940, PMID:19934221

• يتوضع AKT1 في السيتوبلازم والنواة وغشاء البلازما والفضاء بين الغشاء الميتوكوندري. يتم التعبير عنه بشكل واسع، مع ملاحظة مستويات مرتفعة من الفوسفو- Ser473 في سرطانات البروستاتا والثدي، مما يربطه بالإشارات المسرطنة.

إرشادات تجريبية ونصائح تقنية

• تم إنتاج الجسم المضاد ضد ببتيد مفسفر صناعي يتوافق مع بقايا محيطة بـ Ser473 من Akt1 البشري؛ يُنظر في استخدام مستخلصات معالجة بالفوسفاتيز أو جسم مضاد غير فسفوري لـ AKT1 كعنصر تحكم سلبي للتحقق من خصوصية الفسفرة.
• في لطخة ويسترن، من المتوقع ظهور شريط وحيد عند ~56 كيلو دالتون؛ استخدم عناصر تحكم إيجابية مناسبة (مثل مستخلصات من خلايا محفزة بالأنسولين أو عامل نمو البشرة) وقم بتحميل كميات وأوقات تعرض مثلى.
• في مقايسة الممتز المناعي المرتبط بالإنزيم، يمكن أن يساعد طلاء اللوحة بالببتيد الفسفوري والببتيد غير الفسفوري في تقييم الارتباط الخاص بالفوسفات؛ قم بتضمين خطوات الحجب والغسيل لتقليل الخلفية غير النوعية.
• يشار إلى التفاعل التبادلي للإنسان والفأر والجرذ؛ ومع ذلك، يوصى بالتحقق من الصلاحية في مصفوفة العينة ذات الصلة لكل كائن حي.
• نظرًا لأن الجسم المضاد يتعرف على الشكل المفسفر لـ AKT1، فقد يكتشف أيضًا أشكال AKT الأخرى (AKT2، AKT3) إذا كان الحاتمة محفوظة؛ قم بتأكيد الخصوصية باستخدام نماذج إسكات أو حذف جيني خاصة بالشكل إذا لزم الأمر.

كاميل بيو: جسر التوريد الشامل الخاص بك

كاميل بيو هي شريكك المتكامل لتوريد المواد الخام للتشخيص خارج الجسم الحي، حيث تقدم مجموعة شاملة تشمل أزواج أجسام مضادة تم التحقق منها، وأجسام مضادة أحادية النسيلة ومتعددة النسيلة محسنة، وكميات كبيرة من الكواشف المساعدة، وتوريد متخصص للأهداف النادرة. يدعم هذا الجسم المضاد ضد الفوسفو- AKT1 (Ser473) البحث في مسارات إشارات AKT، خاصة في مجال السرطان واضطرابات التمثيل الغذائي ودراسات بقاء الخلية. من المفهوم إلى العيادة، تيسر كاميل بيو الوصول إلى المكونات الحرجة والخبرة التقنية والاستشارات التنظيمية لتسريع تطوير التشخيص.