جسم مضاد أحادي النسيلة من الأرنب مضاد لـ Cas9 للاستخدام في WB وIF/ICC وELISA - Q99ZW2

المواصفات والمعايير الأساسية للمنتج

الخلفية البيولوجية: وظيفة Cas9 وتوطينه

• يُعد Cas9 (الإندونوكلياز المرتبط بـ CRISPR، ‏Cas9/Csn1) إندونوكلياز DNA موجّهًا بواسطة RNA بوزن 158.4 كيلو دالتون، ويشكّل النواة الإنزيمية لنظام المناعة التكيفية CRISPR-Cas من النوع II في Streptococcus pyogenes. المراجع ذات الصلة: PMID:21455174
• في دوره البيولوجي الطبيعي، يحمي Cas9 البكتيريا من البلازميدات الغازية وDNA الفيروسي من خلال دمج تسلسلات أجنبية قصيرة (فواصل) في مواضع CRISPR، مما يوفر ذاكرة جينية للمناعة النوعية للتسلسل. المراجع ذات الصلة: PMID:21455174
• يتطلب Cas9 جزيئين صغيرين من RNA — ‏RNA الخاص بـ CRISPR ‏(crRNA) وcrRNA المُفعِّل عبر النقل (tracrRNA) — للارتباط بـ DNA الهدف وللنشاط النووي؛ ويكون غير نشط تحفيزيًا في غياب جزيئات RNA المرشدة هذه. المراجع ذات الصلة: PMID:24270795 PMID:24476820
• يُحدَّد التعرف على الهدف بواسطة دافع قصير مجاور للبروتوسبيسر (PAM؛ ‏5'-NGG-3') داخل تكرار CRISPR، والذي يعمل على التمييز بين DNA الذاتي وغير الذاتي؛ إذ يؤدي ارتباط PAM إلى بدء فصل شريطي DNA وتكوين مزدوج غير متجانس. المراجع ذات الصلة: PMID:24476820
• عند التعرف على PAM، يحفّز Cas9 القطع الإندونوكليازي للشريط الهدف غير المتكامل مع crRNA، يليه تقليم إكسونوكليازي من 3' إلى 5'؛ وتعتمد كلتا خطوتي التحلل النووي على أيونات المغنيسيوم أو المنغنيز. المراجع ذات الصلة: PMID:24476820
• في نضج RNA الخاص بـ CRISPR، لا يحفّز Cas9 المعالجة؛ بل يعمل على تثبيت الازدواج pre-crRNA:tracrRNA، مما يتيح القطع الدقيق بواسطة الريبونوكلياز III المضيف. المراجع ذات الصلة: PMID:24270795

الإرشادات التجريبية والنصائح التقنية

• يمتد المستضد المناعي عبر الأحماض الأمينية 450-730 من Cas9، وهي منطقة تشمل نطاق نوكلياز HNH ونطاق التفاعل مع PAM. بالنسبة إلى الترحيل الغربي، يُنصح باستخدام محاليل الخلايا المنقولة بـ Cas9 أو Cas9 مؤتلف كامل الطول ومنقّى كعنصر تحكم إيجابي؛ ويبلغ الوزن الجزيئي المتوقع 158 كيلو دالتون.
• في التألق المناعي/ICC، قد يختلف توطين Cas9 اعتمادًا على RNA المرشد والهدف. تحقّق من ظروف التثبيت والنفاذية باستخدام عناصر التحكم المناسبة، وأكّد النوعية باستخدام خطوط خلايا ذات تعطيل أو إسكات لـ Cas9 إن توفرت.
• بالنسبة إلى ELISA، يمكن استخدام جزء Cas9 المؤتلف لإنشاء منحنى معياري؛ ومع ذلك، ينبغي تقييم التفاعل المتصالب مع Cas9 الداخلي المنشأ أو أفراد العائلة الآخرين في المصفوفة البيولوجية ذات الصلة قبل التطبيق الكمي.
• من المتوقع أن يتفاعل هذا الجسم المضاد بشكل متصالب على نطاق واسع، بما في ذلك مع Cas9 البشري. عند استخدام عينات من أنواع أخرى، يُوصى بإجراء تحقق أولي لتأكيد التفاعل المتوقع.

CamelBio: جسر التوريد الشامل الخاص بك

توفر CamelBio لمصنّعي التشخيص والمختبرات البحثية وشركات التكنولوجيا الحيوية وصولًا شاملًا من مصدر واحد إلى مواد خام عالية الجودة للاستخدام التشخيصي المخبري (IVD)، وخدمات تقنية، واستشارات — لدعم المشاريع من مرحلة الفكرة حتى العيادة. صُمم هذا الجسم المضاد أحادي النسيلة ضد Cas9 خصيصًا لأبحاث CRISPR، وتطوير أدوات تحرير الجينات، وتصميم الاختبارات التشخيصية. نوفر أزواجًا من الأجسام المضادة التي تم التحقق من صلاحيتها، وأجسامًا مضادة أحادية ومتعددة النسائل محسّنة، وكواشف مساعدة بكميات كبيرة، وتوريد مواد خام لأهداف نادرة لتبسيط سير عملك.